Utilización de dos soportes para la inmovilización de la papaína
Palabras clave:
Carbón activado, Alúmina, Tiempo de contacto, Estabilidad operativa, Inmovilización de papaína, TemperaturaResumen
Con la intención de preparar suplementos dietéticos de bajo coste, se inmovilizó papaína en carbón activado (CA) yen alúmina, utilizando suero como fuente de proteínas hidrolizadas. Para determinar el índice de inmovilización secuantifi caron las enzimas no adsorbidas mediante el método de Lowry. Se analizó el efecto del tiempo de contactoy la temperatura, considerándose 30 min. a 25 ºC como la condición óptima para inmovilizar la papaína en ambossoportes. El CA presentó unos índices de inmovilización muy superiores (entre 95% y 99%) a los de la AL (entre4% y 13%). Para evaluar la capacidad de reutilización de la papaína se midió la actividad residual de la enzimadespués de haber sido utilizada hasta 20 veces. Para determinar la actividad de la enzima se cuantifi có el índice deexposición de la fenilalanina mediante espectrofotometría de derivada segunda. En este caso, la AL presentó mejoresresultados que el CA, ya que la actividad de la papaína seguía siendo la misma después de haber sido utilizada 15y 5 veces, respectivamente.Descargas
Citas
Afaq S, Iqbal J. Immobilization and stabilization of papain on chelating sepharose: a metal chelate regenerable carrier. EJB 2001; 4: 120-124.
Zhuang P, Butterfield DA. Structural and enzymatic characterizations of papain immobilized onto vinyl alcohol/ vinyl
butyral copolymer membrane. J. Memb. Sci. 1992; 66: 247-257.
Dinella C, Stagni A, Lanzarini G. Pectolytic enzymes co-immobilization on ?-alumina spheres via organophosphates
compounds. Process Biochem. 1997; 32: 715-722.
Rani AS, Das MLD, Satyanarayana S. Preparation and characterization of amyloglucosidase adsorbed on activated
charcoal. J. Mol. Catal. B 2000; 10: 471-476.
Furegon L, Peruffo ADB, Curioni A. Immobilization of rice limit dextrinase on ?- alumina beads and its possible use
in starch processing. Process Biochem. 1996; 32: 113-120.
Moreno JM, Sinisterra JV. Immobilization of lipase from Candida cylindracea on inorganic supports. J. Mol. Catal.
; 93: 357-369.
Kilinç A, Önal S, Telefoncu A. Stabilization of papain by modification with chitosan. Turk. J. Chem. 2002; 26: 311-
Ladero M, Santos A, García-Ochoa F. Kinetic modeling of lactose hydrolysis with an immobilized ?-galactosidase from
Kluyveromyces fragilis. Enz. Microb. Technol. 2000; 27: 583-592.
Al-Duri B, Yong YP. Lipase immobilisation: An equilibrium study of lipases immobilised on hydrophobic and hydrophilic/
hidrophobic supports. Biochem. Eng. J. 2000; 4: 207-215.
Durán N, Rosa MA, D’annibale A, Gianfreda L. Applications of laccases and tyrosinases (phenoloxidases) immobilized
on different supports: a review. Enz. Micro. Technol. 2002; 31: 907-931.
Nakanishi K, Sakiyama T, Imamura K. On the adsorption of proteins on solid surfaces, a common but very complicated
phenomenon. J. Biosc. Bioeng. 2001; 91: 233-244.
Serralha FN, Lopes JM, Lemos F, Prazeres DMF, Aires-Barros MR, Cabral JMS, Ramôs-Ribeiro F. Zeolites as supports
for an enzymatic alcoholysis reaction. J. Mol. Catal. B. 1998; 4: 303-311.
Tu W, Sun S, Nu S, Li X. Immobilization of ?-galactosidase from Cicer arietinum (gram chocken bean) and its catalytic
actions. Food Chem. 1999; 64: 495-500.
Hosseinkhani S, Nemat-Gorgani M. Partial unfolding of carbonic anhydrase provides a method for its immobilization
on hydrophobic adsorbents and protects it against irreversible thermoinactivation. Enz. Microb. Technol. 2003; 33: 179-184.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Bio. Chemi. 1951; 193: 265-275.
Costa SA, Tzanov T, Paar A, Gudelj M, Gübitz GM, Cavaco-Paulo A. Immobilization of catalases from Bacillus SF on alumina for the treatment of textile bleaching afflents. Enz. Microb. Technol. 2001; 28: 815-819.
Tzanov T, Costa SA, Gübitz GM, Cavaco-Paulo A. Hydrogen peroxide generation with immobilized glucose oxidase
for textile bleaching. J.Biotechn. 2002; 93: 87-94.
Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analyt. Biochem. 1976; 72: 248-254.
Beyon R, Bond JS. Proteolytic enzymes: a practical approach. The practical approach series. Oxford: Oxford University Press; 2001
Li YF, Jia FY, Li JR, Liu G, Li YZ. Papain immobilization on a fibre carrier containing primary amine groups. Biotechnol. Assl. Biochem. 2001; 33: 29-34.
Barbosa CMS, Morais HA, Delvivo FM, Mansur HS, Oliveira MC, Silvestre MPC. Papain hydrolysates of casein: molecular weight profile and encapsulation in lipospheres. J. Sci. Food Agric. 2004; 84: 1891-1900.
Lopes DCF, Delvivo FM, Silvestre MPC. Hydrolysates of skim milk powder: peptide profiles for dietetic purposes. Brit. Food J. 2005; 107: 42-53.
Lin H, Wang H, Xue C, Ye M. Preparation of chitosan oligomers by immobilized papain. Enz. Microb. Technol. 2002; 31: 588-592.
Hartree EF. Determination of protein: a modification of the Lowry method that gives a linear photometric response. Anal. Biochem. 1972; 45: 422 – 427.
Morais HA, Silva VDM, Oliveira MC, Silvestre MPC. Characterization of free aromatic amino acids and estimation of exposition rate of Phe in casein hydrolysates by second derivative. Acta Cient. Venez. 2004; 55:1-6.
Lopes DCF, Delvivo FM, Silvestre MPC. Use of activated carbon for removing phenylalanine from skim milk powder. Food Sci. Technol. 2005; 38: 447-453.
Pimentel-Gomes F. Curso de estatística experimental. Piracicaba: Nobel; 2000.
Giles CH. Adsorption. In: Heftman E. Chromatography. New York: Reinhold; 1961.
Whithaker JR. Effect of substrate concentration on rates of enzyme catalyzed reaction. In: Principles of enzymology for the food science. California, Marcel Dekker; 1994.
Huckel M, Wirth H-J, Hearn MTH. Porous zirconia: a new support material for enzyme immobilization. J. Biochem. Biophys. Methods 1996; 31: 165-179.
Ichikawa T, Terada H. Second derivative spectrophotometry as an effective tool for examining phenylalanine residues
in proteins. Biochim. Biophys. Acta 1977; 494: 267-270.
Barbosa CMS, Morais HA, Silva VDM, Oliveira MC, Silvestre MPC. Padronização de método analítico para avaliação do grau de exposição da fenilalanina em hidrolisados de caseína, por espectrofotometria derivada segunda. Rev. Bras. Ciên. Farmac. 2002; 38: 113-119.
Soares DLR, Biasutti EAR, Capobiango M, Vieira CR, Silva VDM, Januário JN, Aguiar MJB, Silvestre MPC. Preparation of enzymatic skim milk hydrolysates with low phenylalanine content. Acta Famac.Bon. 2006 (in press).
Miclo L, Perrin E, Driou A, Mellet M, Linden G,. Determination of the ratios of the aromatic amino acids residues by first- or second-derivative UV spectrometry for a simple characterization of peptides. Int. J. Pep. Prot. Res. 1995; 46: 186-192.
Levillain P, Fompeydie D. Spectrophotométrie dérivée: intérêt, limites et apllications. Analysis 1986; 14: 1-20.
Zhao Q, Sannier F, Garreau I, Lecoeur C, Piot JM. Reversed-phase high-performance liquid chromatography coupled with second-order derivative spectroscopy for the quantitation of aromatic amino acids in peptides: application to hemorphins. J. Chromatog. A 1996; 723: 35-41.
Bhardwaj A, Lee J, Glauner K, Ganapathi S, Bhattacharyya D, Butterfield DL. Biofunctional membranes: an EPR study of active site structure and stability of papain non-covalently immobilized on the surface of modified poly(ether)sulfone membranes through the avidin-biotin linkage. J. Memb. Sci. 1996; 119: 241-252.
Butterfield DL, Lee J, Ganapathi S, Bhattacharyya D. Biofunctional membranes Part IV. Active-site structure and stability of an immobilized enzyme, papain, on modified polysulfone membranes studied by electron paramagnetic resonance and kinetic. J. Memb. Sci. 1994; 91: 47-64.
Descargas
Publicado
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Los artículos que se publican en esta revista están sujetos a los siguientes términos en relación a los derechos patrimoniales o de explotación:
- Los autores/as conservarán sus derechos de autor y garantizarán a la revista el derecho de primera publicación de su obra, la cual se distribuirá con una licencia Creative Commons BY-NC-SA 4.0 que permite a terceros reutilizar la obra siempre que se indique su autor, se cite la fuente original y no se haga un uso comercial de la misma.
- Los autores/as podrán adoptar otros acuerdos de licencia no exclusiva de distribución de la versión de la obra publicada (p. ej.: depositarla en un archivo telemático institucional o publicarla en un volumen monográfico) siempre que se indique la fuente original de su publicación.
- Se permite y recomienda a los autores/as difundir su obra a través de Internet (p. ej.: en repositorios institucionales o en su página web) antes y durante el proceso de envío, lo cual puede producir intercambios interesantes y aumentar las citas de la obra publicada. (Véase El efecto del acceso abierto).