Desarrollo de un protocolo de análisis de la expresión génica mediante «differential display» que reduce el número de falsos positivos

Autores/as

  • JM VIEITES Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada Granada
  • A SÁNCHEZ-POZO Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada Granada
  • A GIL Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada Granada
  • A SUÁREZ Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada Granada

Palabras clave:

Diferenciación, Enterocitos, Análisis de expresión génica

Resumen

Entre los métodos empleados para los análisis de la expresión de genes, el método de "differentialdisplay" ha sido ampliamente utilizado y, a pesar del uso extendido de los "microarrays", es aún unmétodo válido para el análisis con muestras cuyo transcriptoma es desconocido. Con el objeto de reducirel elevado número de falsos positivos que genera esta técnica, hemos optimizado el protocolo parareducir la posibilidad de generar falsos positivos. En primer lugar, hemos marcado radiactivamente elcebador oligo-dT con lo que los fragmentos de DNA identificados son extremos 3'-UTR de RNAm. Pormuestra hemos realizado dos transcripciones inversas y dos reacciones de PCR en cada una de ellas. Paraseleccionar un fragmento de DNA, debía estar diferencialmente expresado en las 4 reacciones de PCR.Por último, todos los fragmentos fueron clonados y secuenciados por triplicado. Estas modificacionesal protocolo nos ha permitido identificar 5 genes expresados diferencialmente entre células epitelialesde intestino en estado proliferativo y diferenciado.

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Citas

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Publicado

2005-03-20

Cómo citar

1.
VIEITES J, SÁNCHEZ-POZO A, GIL A, SUÁREZ A. Desarrollo de un protocolo de análisis de la expresión génica mediante «differential display» que reduce el número de falsos positivos. Ars Pharm [Internet]. 20 de marzo de 2005 [citado 1 de mayo de 2024];46(2):193-204. Disponible en: https://revistaseug.ugr.es/index.php/ars/article/view/5075

Número

Vol. 46 Núm. 2 (2005)

Sección

Artículos Originales

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