Construcción de vectores basados en la proteína fluorescente verde para análisis genético en bacterias

Autores/as

  • A. SUÁREZ
  • A. GÜTTLER
  • M. STRÄTZ
  • L.H. STAENDNER
  • K.M. TIMMIS
  • C.A. GUZMÁN

Palabras clave:

Proteína fluorescente verde, Minitransposon TnS, Análisis de promotores, Vectores

Resumen

El gen gfp que codifica para la proteína verde fluorescente (GFP) fue utilizado para crear una serie de plásmidos y un minitransposon registradores para el análisis genético. y la monitorización de bacterias. El sistema registrador está integrado en un plásmido para estudio de promotores y en un minitransposon para generar fusiones transcripcionales por inserción al azar en el cromosoma. Con el objeto de mejorar los niveles de sensibilidad necesarios para el uso del sistema en monocopia y para la detección en células individuales, el extremo 3'del gen gfp fue reemplazado por el de otro gen gfp mofidicado que emite luz verde 45 veces más fuerte que la GFP natural. Además, al extremo S' del nuevo gen gfp se fusionó la señal estimuladora de la traducción del gen atpE. La conjugación del minitransposon a dos Pseudomonas spp. diferentes y a Alcaligenes eutrophus produjo fusiones al azar en el cromosoma, de las que un 5% emitían fluorescencia detectable a ojo. La expresión de GFP en células aisladas fue perfectamente visualizada por microscopía de fluorescencia.

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Citas

CODY, C. W., PRASHER, D. C., WESTLER, W. M., PRENDERGAST, F. G. Y WARD, W. W.: "Chemical structure of the hexapeptide chromophore of the Aequorea green-fluorescent protein". B iochemistry (I993), 32: 1212-1218.
CHALFIE, M., TU, Y., EUSKIRCHEN, G., WARD, W. W. Y PRASHER, D. c.: "Green fluorescent protein as a marker for gene expression". Science (1994) 263 :802-805 .

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Publicado

1997-03-20

Cómo citar

1.
SUÁREZ A, GÜTTLER A, STRÄTZ M, STAENDNER L, TIMMIS K, GUZMÁN C. Construcción de vectores basados en la proteína fluorescente verde para análisis genético en bacterias . Ars Pharm [Internet]. 20 de marzo de 1997 [citado 3 de julio de 2024];38(2-3):319-28. Disponible en: https://revistaseug.ugr.es/index.php/ars/article/view/21219

Número

Vol. 38 Núm. 2-3 (1997)

Sección

Artículos Originales

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